創(chuàng)造一個(gè)更具可持續(xù)性的未來(lái)

銀水灣論壇會(huì)議筆記|田志軍:我國(guó)豬藍(lán)耳病疫苗和檢測(cè)技術(shù)研究新進(jìn)展

一、我國(guó)豬藍(lán)耳病流行現(xiàn)狀

豬藍(lán)耳?。?/font>PRRS)自1995年在我國(guó)被發(fā)現(xiàn)以來(lái),30 年間多數(shù)時(shí)候是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的首要疾病。即便在非洲豬瘟影響顯著的當(dāng)下,“防非控藍(lán)”仍是養(yǎng)豬業(yè)疫病防控的核心任務(wù)。PRRSV(豬繁殖與呼吸綜合征病毒)是導(dǎo)致我國(guó)母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病的最主要直接病原或原發(fā)病原,能否有效控制其造成的損失,直接關(guān)系到規(guī)模化養(yǎng)豬企業(yè)的行業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力。

image.png

12年的流行病學(xué)調(diào)查顯示,2006-2015年,以高致病性PRRSVHP-PRRSV)為代表的L8分支病毒是我國(guó)主流流行株;2016年起,以類NADC30毒株為代表的L1分支逐漸成為優(yōu)勢(shì)株,截至2025年,其分布占比已超75%。在全球范圍內(nèi)(歐洲除外),L1分支也是主要流行株。當(dāng)前流行的L1A變異株和類OYYZ PRRSV多為以類NADC30 PRRSV為骨架的重組病毒。

我國(guó)現(xiàn)有PRRSV疫苗以L8分支為主,而L1分支疫苗將成為未來(lái)20年防控產(chǎn)品的熱點(diǎn)。

image.png

關(guān)于類NADC34 PRRSVL1A 變異株)的流行現(xiàn)狀:我國(guó)檢出的類NADC34毒株為重組病毒,其基因組約三分之二的序列與類NADC30 PRRSV重疊。

我國(guó)類NADC30 PRRSV的特征如下:

臨床發(fā)病特點(diǎn):①仔豬呼吸道癥狀嚴(yán)重,死淘率達(dá) 10%-50%;②細(xì)菌繼發(fā)感染情況突出;③母豬流產(chǎn)率顯著升高。

分子特征:①形成獨(dú)立分支(Sublineage 1.8);②非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2存在特征性131個(gè)氨基酸缺失(111+1+19 模式);③重組模式復(fù)雜多樣;④多數(shù)毒株難以通過(guò)細(xì)胞分離。

image.png

現(xiàn)有商品化疫苗對(duì)類NADC30 PRRSV的保護(hù)效果有限:近10年來(lái),隨著類NADC30毒株的流行,相關(guān)疫苗不斷研發(fā)應(yīng)用,但由于L1分支及8.7分支病毒變異快、時(shí)間跨度大,容易出現(xiàn)保護(hù)力下降的情況。

美國(guó)每年因PRRS造成的損失超12億美元(每頭出欄豬約12美元),其L1分支PRRSV疫苗研發(fā)處于世界領(lǐng)先水平。目前美國(guó)主流使用的Prevacent疫苗為減毒活疫苗(MLV),屬于L1D分支,2018年上市后市場(chǎng)份額從20%升至2024年的60%,已在墨西哥、菲律賓、泰國(guó)、越南、韓國(guó)等地推廣,即將進(jìn)入臺(tái)灣和日本市場(chǎng)。

image.png

我國(guó)當(dāng)前PRRSV流行的主要特點(diǎn):

以類NADC30毒株為代表的L1分支是主流流行株,類HP-PRRSV次之,兩者合計(jì)檢出率超90%,病毒毒力以中等及以上為主。

不同養(yǎng)殖區(qū)域的PRRSV差異顯著,推測(cè)病毒感染并非以外來(lái)輸入為主要途徑。

二、類NADC30豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(SD-R 株)的研制

image.png

NADC30 PRRSV野毒株(SD 株)的篩選:類NADC30 PRRSV遺傳多樣性復(fù)雜,重組模式多樣,重組熱點(diǎn)集中在非結(jié)構(gòu)蛋白NSP9及次要結(jié)構(gòu)蛋白GP2a-4。絕大多數(shù)毒株對(duì)仔豬具有中等致病力,SD株以類NADC30 PRRSV為骨架,在NSP9GP2a-4蛋白的熱點(diǎn)區(qū)域發(fā)生重組,是我國(guó)PRRSV變異流行株的代表性毒株。

image.png

SD-R株的培育:通過(guò)3次噬斑克隆,在Marc-145細(xì)胞上連續(xù)傳代,獲得遺傳穩(wěn)定的疫苗候選株,命名為SD-R株(F125代)。

安全性評(píng)價(jià):高劑量或重復(fù)劑量免疫仔豬后,僅個(gè)別豬在部分檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)低水平病毒血癥,安全性良好。

保護(hù)效果評(píng)價(jià):

同源保護(hù):

image.png


對(duì)類NADC30同源毒株(SD 株)可提供完全臨床保護(hù)。

異源保護(hù):

image.png

針對(duì)類NADC30異源毒株(WK108 株,與SD株全基因組核苷酸同源性10.1%,中等致病力),可提供完全臨床保護(hù)。

image.png

針對(duì)類NADC34毒株(TZJ1341株),免疫組攻毒后無(wú)發(fā)熱,7-14天血液病毒載量顯著降低,血液和組織帶毒豬數(shù)量少于對(duì)照組,保護(hù)效果良好。

image.png

針對(duì)高致病性毒株(HuN4 株),免疫組僅部分豬出現(xiàn)一天體溫≥40.5℃,無(wú)死亡,增重與空白對(duì)照組無(wú)顯著差異,顯著高于攻毒對(duì)照組,保護(hù)效果較好。

小結(jié):

L1分支類NADC30為代表的PRRSV已成為我國(guó)主要流行毒株。

經(jīng)傳代致弱獲得的類NADC30 PRRSV SD-R株,安全性與現(xiàn)有經(jīng)典PRRSV活疫苗相當(dāng)(10倍劑量接種4周齡仔豬無(wú)體溫反應(yīng),病毒血癥水平低)。

效力試驗(yàn)顯示,SD-R株對(duì)同源和異源類NADC30毒株可產(chǎn)生完全臨床保護(hù),對(duì)類NADC34毒株和HP-PRSV也可產(chǎn)生較好保護(hù),為我國(guó)豬藍(lán)耳病防控提供了新手段和策略。

三、豬藍(lán)耳病單抗阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研制

研究背景:豬常見(jiàn)傳染病的抗體檢測(cè)中,國(guó)際主流方法為單抗阻斷ELISA(包被抗原為全病毒),具有高特異性和敏感性,其技術(shù)瓶頸在于能否獲得具有特異廣譜檢測(cè)價(jià)值的單抗。

哈獸研研發(fā)的N蛋白阻斷ELISA試劑盒,與商品化試劑盒(IDEXX、金諾)的比較如下:

7f99d359edd88bd5ec22827a4c4671fc.png

該試劑盒的優(yōu)勢(shì):

image.png

特異性強(qiáng):基于病毒特異性單抗和全病毒包被,對(duì)6種豬常見(jiàn)傳染病陽(yáng)性血清檢測(cè)均為陰性,對(duì)其他譜系毒株陽(yáng)性血清均為陽(yáng)性,特異性和廣譜性良好。

image.png

敏感性高:血清4倍稀釋可提高敏感性,檢出限比IDEXX高一個(gè)滴度;對(duì)高致病性疫苗毒(HuN4-F112)免疫后2周即可檢測(cè)到抗體,PI%IDEXX S/P 值呈強(qiáng)線性關(guān)系;對(duì)類MLV毒株(SDHS192)免疫后7 天轉(zhuǎn)陽(yáng)(IDEXX10 天),PI%IDEXX S/P值呈指數(shù)關(guān)系,與IDEXX試劑盒符合率達(dá)94.35%。 

對(duì)我國(guó)PRRS主要流行株的抗體檢測(cè)結(jié)果顯示:

可檢測(cè)Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ譜系毒株及歐洲型等國(guó)內(nèi)流行毒株。

高致病性疫苗免疫后2周抗體轉(zhuǎn)陽(yáng),PI值與IDEXX S/P 值呈強(qiáng)線性關(guān)系(按周采血)。

MLV、類NADC30、類NADC34 攻毒或免疫后7-10天抗體轉(zhuǎn)陽(yáng),PI值與IDEXX S/P值呈強(qiáng)指數(shù)關(guān)系(按天采血)。

小結(jié):

國(guó)際上首次成功研制PRRSV N蛋白單抗阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒。

適用于PRRSV陰性豬場(chǎng)的抗體監(jiān)測(cè)、陽(yáng)性豬場(chǎng)感染強(qiáng)度判定及豬藍(lán)耳病活疫苗抗體水平評(píng)估。

四、豬藍(lán)耳病的防控策略

種豬防控策略:種源性疫病的防控核心是種豬。豬場(chǎng)PRRS通常先從妊娠母豬開(kāi)始(影響生產(chǎn)性能),再傳播至仔豬,且仔豬病原與母豬場(chǎng)一致;豬場(chǎng)種源多樣性與PRRSV復(fù)雜性高度相關(guān)。

image.png

藍(lán)耳陰性母豬場(chǎng)(原種場(chǎng)):需維持陰性狀態(tài),制定轉(zhuǎn)陽(yáng)應(yīng)對(duì)預(yù)案。

藍(lán)耳陽(yáng)性穩(wěn)定場(chǎng):需維持穩(wěn)定狀態(tài),做好活躍期應(yīng)對(duì)準(zhǔn)備。

藍(lán)耳陽(yáng)性活躍場(chǎng)(商品場(chǎng),平均出欄豬藥費(fèi)超30元):需通過(guò)有效免疫和馴化實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定。

引種時(shí)應(yīng)促進(jìn)現(xiàn)有種豬與引進(jìn)種豬快速融合穩(wěn)定;陽(yáng)性穩(wěn)定的商品母豬群(經(jīng)免疫或馴化)與雙陰性母豬群一樣,可生產(chǎn)雙陰性仔豬,這是培育陽(yáng)性穩(wěn)定商品母豬群的關(guān)鍵。

仔豬防控策略:“藍(lán)耳病搭臺(tái),細(xì)菌唱戲”——同一PRRSV 毒株對(duì)不同來(lái)源(地域、養(yǎng)殖規(guī)模等)仔豬的致病力(引發(fā)細(xì)菌繼發(fā)感染的程度)差異較大,可能導(dǎo)致高死淘率和高藥費(fèi)。

image.png

藍(lán)耳陰性及陽(yáng)性穩(wěn)定仔豬場(chǎng):需維持現(xiàn)狀,制定轉(zhuǎn)陽(yáng)應(yīng)對(duì)策略。

藍(lán)耳陽(yáng)性活躍仔豬場(chǎng)(平均出欄豬藥費(fèi)超 30 元):需通過(guò)有效免疫和馴化降低出欄藥費(fèi)。

仔豬防控效果與母豬群防控效果高度相關(guān)。

image.png

總結(jié)

豬藍(lán)耳病是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的最重要疫病之一,當(dāng)前處于PRRSV活躍期,以類NADC30毒株為主的L1分支是主要流行株,類HP-PRRSV次之?!芭c藍(lán)共舞”“與藍(lán)俱進(jìn)”是養(yǎng)豬業(yè)必須長(zhǎng)期面對(duì)的現(xiàn)實(shí),需積極應(yīng)對(duì)。

認(rèn)清豬藍(lán)耳病的主要危害,解決問(wèn)題需抓住“主要矛盾”,基于“利大于弊”原則,選擇適合自身且性價(jià)比高的防控方案。

 


會(huì)議筆記由哈爾濱國(guó)生生物醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司楊志超記錄整理。