銀水灣論壇會(huì)議筆記|張洪亮:我國PRRSV的流行趨勢與抗原檢測試劑盒研制及應(yīng)用
一、我國PRRSV的流?趨勢
1.非洲豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征(豬藍(lán)耳?。⒇i流?性瀉是危害我國養(yǎng)豬業(yè)最主要的三?疫病。
2.豬藍(lán)耳病主要引起母豬流產(chǎn)和仔豬呼吸道疾病,同時(shí)伴有不同程度的繼發(fā)細(xì)菌感染。
3.歐洲型PRRSV分為4個(gè)亞型,其中Western Eouropean Subtype I具有全球流行性。
4.美洲型PRRSV分為9個(gè)lineages,其中L1分? PRRSV具有全球流?性,L1、L8分支對(duì)我國影響最大。
5.2016年以前是高致病性藍(lán)耳代表的L8分支,2016年以后是NADC30代表的L1分支。
6.L1A變異株(類 30 + HP + 類 34)的出現(xiàn)與流行。
二、PRRSV抗原檢測試劑盒研制及應(yīng)用
1.PRRSV 抗原檢測試劑盒研制難點(diǎn)
(1)中國的PRRSV亞型眾多,變異快,基因組差異?,很難找到絕對(duì)保守的位置。
(2)PRRSV毒株復(fù)雜多樣,重組復(fù)雜,多毒株混合感染現(xiàn)象普遍。
(3)同一類型毒株,序列一致的情況下,基因組二級(jí)結(jié)構(gòu)可能存在較?差異。
(4)不同亞型探針序列,與發(fā)光/淬滅集團(tuán)的適配性存在差異。
2.PRRSV檢測試劑盒的選擇

3.PRRSV檢測采樣類型
(1)建議死淘豬采扁桃體、頜淋、肺臟。
(2)發(fā)病?峰期可以采血或死淘豬采扁桃體、頜淋、肺臟。
(3)流產(chǎn)豬的血及胎?檢出?例低,建議送7-21天的同批次弱仔的扁桃體、頜淋、肺臟。
(4)日常檢測可以送口?液、臍帶血等,我們對(duì)日常監(jiān)測的建議是保留死淘豬的扁桃體、頜淋、肺臟集中送檢或隨時(shí)送檢。
4.PRRSV檢測試劑盒ct值差異及與病毒載量的關(guān)系分析
(1)同一份數(shù)據(jù),曲線正常的ct值??與設(shè)置有關(guān)。
(2)同一款試劑盒更換酶(尤其是自研試劑盒)或者熒光定量PCR
儀對(duì)ct值及曲線的形態(tài)均會(huì)產(chǎn)?較?影響。
(3)對(duì)于同一款批次穩(wěn)定的試劑盒,其ct值的??與病毒載量有關(guān)
(縱向?較),不同試劑盒之間沒有可?性(橫向?較)。
5.PRRSV檢測試劑盒ct值與測序
(1)ct值,病毒載量?,就一定能測序嗎?
①不同試劑盒CT值沒有可?性,他家ct值35可以測出來,你家ct值30也未必測出。
②ct值小,但是無法測序,排除?為因素,可能存在以下三?原因:一是存在非特異性過高;二是測序引物與當(dāng)前毒株不匹配;三是普通PCR所用酶的敏感性不夠。
(2)我們研究的一款美洲型和歐洲型一步法熒光RT-PCR試劑盒ct值與測序的關(guān)系:ct≤30測序率接近100%;30<ct≤35測序率約40%;
35<ct≤38測序率不?10%(配套4+2+N測序引物)。
6.PRRSV測序解讀-毒株類型判斷
(1)如果能夠獲得PRRSV的全基因組,對(duì)毒株類型的判斷相對(duì)?較準(zhǔn)確。
(2)而多數(shù)情況下,我們只獲得了PRRSV的部分基因,如NSP2部基
因、ORF5、ORF7基因等。那如何更好的判斷豬場的毒株類型呢?
①NSP2+ORF5/ORF7:?概率能夠反映這個(gè)毒株類型。
②NSP2/ORF5/ORF7之一:只能是粗略判斷毒株類型。
三、結(jié)論
1.我國的PRRS呈現(xiàn)美洲型和歐洲型雙基因型以及多個(gè)亞型共存的局面。我國的美洲型PRRSV 呈現(xiàn)“30+”、歐洲型PRRSV呈現(xiàn)基因組“差異?”、豬場內(nèi)PRRSV呈現(xiàn)多毒株“混合感染”的新特點(diǎn)。
2.PRRSV抗原檢測試劑盒研制難度?,不同試劑盒之間的差異?,選擇合適的試劑盒,并正確運(yùn)用,為豬場PRRSV的監(jiān)測及防控助力。
會(huì)議筆記由哈爾濱國生生物科技股份有限公司曹野記錄整理。








