一、研究背景

PRRSV的高度變異性導(dǎo)致PRRS難防難控，因此對該疾病的日常監(jiān)測及抗體診斷就顯得尤為重要。一直以來從抗原檢測方面都能夠很好的區(qū)分美洲型與歐洲型PRRSV。應(yīng)用本研究的這兩款試劑盒在抗體檢測方面我們同樣可以將它們進行區(qū)分。

豬病常見的國外進口ELISA檢測試劑盒很多是基于單抗的阻斷/競爭ELISA方法。王老師的觀點認(rèn)為，一方面應(yīng)用單抗進行檢測產(chǎn)品的研發(fā)能夠保證產(chǎn)品的特異性；另一方面間接ELISA檢測方法對于抗原的制備要求更為嚴(yán)格，技術(shù)更加繁瑣。因此團隊聚焦于單抗創(chuàng)制了這兩個診斷方法的試劑盒。

二、N阻斷/M競爭ELISA試劑盒的研制及特點

《PRRSV單抗阻斷ELISA抗體檢測試劑盒-N蛋白抗體》

研發(fā)團隊實驗室獲得的N蛋白單克隆抗體識別N蛋白末端表位，并能夠暴露于N蛋白的同源二聚體表面。保證了抗體檢測的準(zhǔn)確性和廣譜性。

經(jīng)實驗驗證其能夠被陽性血清阻斷，能夠用于阻斷ELISA檢測方法的建立。經(jīng)過條件摸索，多次反復(fù)檢測驗證，并與IDEXX試劑盒對比發(fā)現(xiàn)，該方法能夠在病毒感染后早于IDEXX試劑盒檢出抗體，保證檢測敏感性與特異性的同時能夠減少假陽性的檢出，節(jié)約豬場成本。

小結(jié)：

1.在國際上首次成功研制PRRSV N蛋白單抗阻斷ELISA抗體檢測試劑盒；

2.該試劑盒特異性好，敏感性高；

3.該試劑盒可用于豬藍(lán)耳病陰性豬場日常監(jiān)測；

4.該試劑盒可用于豬藍(lán)耳病凈化過程中抗體監(jiān)測；

5.該試劑盒可用于豬藍(lán)耳病防控定期抗體監(jiān)測，根據(jù)抗體陽性率、阻斷率等數(shù)值變化判斷豬場感染豬藍(lán)耳病病毒的狀況；

6.該試劑盒可用于豬藍(lán)耳病疫苗免疫或野毒馴化的效果評估。

《PRRSV單抗競爭ELISA抗體檢測試劑盒-M蛋白抗體》

該M蛋白單抗能夠識別所有美洲型毒株，而不識別歐洲型毒株。該試劑盒在病毒感染后的抗體檢出時間雖晚于N蛋白試劑盒，經(jīng)過多次檢測結(jié)果表明，在PRRSV感染后M蛋白產(chǎn)生的抗體水平能夠持續(xù)上升，而N蛋白抗體則隨著時間推移在4-5w后有所下降。并且M抗體檢測結(jié)果與血清中和實驗具有相關(guān)性，但N蛋白抗體檢測結(jié)果及IDEXX試劑盒檢測結(jié)果與血清中和實驗完全不具有相關(guān)性。因此該方法能夠在一定程度上反映中和抗體水平。

經(jīng)過大量臨床血清樣品檢測結(jié)果表明，M試劑盒檢出率多于N試劑盒，且檢出多為仔豬血清，經(jīng)IFA驗證確定為陽性。因此該方法用于仔豬血清抗體檢測能夠有效避免單純檢測N抗體造成的假陰性結(jié)果導(dǎo)致的豬場損失。

總結(jié)

1.在國際上首次成功研制北美型PRRSV M蛋白單抗競爭ELISA抗體檢測試劑盒，其敏感性高，特異性好；

2.檢測仔豬母源抗體時，M蛋白持續(xù)時間長于N蛋白抗體；

3.該試劑盒檢測特異性優(yōu)于進口M蛋白間接ELISA抗體檢測試劑盒；

4.該試劑盒與N蛋白抗體檢測試劑盒配合使用，能夠使仔豬抗體檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。

會議筆記由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所馮子萱記錄整理。