一、樣本采集的原則

1.影響檢測結(jié)果的因素

（1）樣本是否新鮮無污染。

（2）選擇合適的樣本及樣本數(shù)量。（例：千頭豬場抗體評估需30份血清）

（3）注意生物安全防范，防止交叉污染。  

（4）清晰的背景信息，避免活疫苗免疫后檢測。

2. 基本原則

（1）疾病動態(tài)過程：藍耳病的病毒血癥期短，血液中難捕捉病毒。病毒血癥期過后須選擇更敏感樣本（如組織、拭子）。  

（2）樣品采集要明確檢測目的，是病毒分離、診斷還是測序；操作需規(guī)范，避免交叉污染；背景信息準確性，需記錄免疫史、采樣時間等關鍵信息。  

（3）注意樣本保存與運輸，藍耳病病毒易降解，需冷凍保存運輸。

（4）樣品處理與檢測流程須符合標準，提取和擴增試劑注意匹配。  

二、樣本采集、處理與保存

1. 樣本采集

（1）血液樣本：通過前腔靜脈采血（在兩前肢與氣管交匯處針頭偏氣管15°進針）或尾靜脈采血（尾骨間凹陷處15°-30°進針深12mm）。血液低速離心分離血清。血清狀態(tài)分為七個等級：一級為標準樣本，血清呈半透明、淡黃色，無膠凍狀。三級以上溶血不能用于檢測，會造成假陽性。

（2）拭子樣本：包括咽拭子（采扁桃體擦拭液）、鼻拭子（雙鼻孔各轉(zhuǎn)3圈）、肛拭子（棉簽入直腸2-3cm）。

（3）唾液樣本：多應用于大欄采樣。采樣時間一般選擇采食前/后2小時，咬繩時間控制在30分鐘，須添加核酸保護劑防降解。

（4）組織液樣本：主要研究樣本為豬扁桃體口腔擦拭液和舌尖液。當其檢測為陰性時，其對應的同窩活仔豬群實際未感染PRRSV的概率極高。

2.樣本處理

混樣規(guī)則：組織≤5份/混樣；拭子≤3份/混樣；異常樣本單獨檢測。

拭子類：使樣本浸入生理鹽水旋渦震蕩完全。

糞便樣本：低速離心去除雜質(zhì)，取上清檢測。  

干燥樣本：適量加生理鹽水，控制量在能夠滿足復檢即可。

組織樣本：充分勻漿后離心。

3.樣本保存

血清：20℃以下穩(wěn)定（30℃以上降解快）。 

口腔液、糞便：需冷凍（-80℃長期最佳）。口腔液反復凍融易降解。

三、藍耳檢測數(shù)據(jù)分享

1. 監(jiān)測方案

母豬場：季度監(jiān)測（4次/年），30份血清/次；

育肥場：1000頭抽10份，2000頭抽20份血清；

抗體合格標準：陽性率≥90%，離散度<40%。

抗原的動態(tài)監(jiān)測基本上是采集母豬的這個口/鼻/肛拭子以及睪丸液進行監(jiān)測。

2.試劑盒選擇

不同廠家試劑盒檢測數(shù)據(jù)的離散度差異大，有的檢測離散度低于40%，有的高于40%，不能一定說明豬養(yǎng)的好或不好，要根據(jù)自己生產(chǎn)的實際情況注意甄別。

3.抗原各個樣本的檢出率

檢出率最高的是拭子，口/鼻/肛的拭子一起采完之后完成檢測，沒有進一步細化區(qū)分檢測率。檢出率第二是血液，第三是睪丸液。      

總結(jié)

1. 樣品采集須遵循選擇敏感樣本、明確檢測目的、規(guī)范操作、背景清晰等原則。

2. 應用科學的方法完成樣本的采集和處理，確保低溫保存和運輸，有效的的樣本是檢測結(jié)果準確的基礎。  

3.制定合理的監(jiān)測方案，注意對試劑盒的甄別，根據(jù)本場生產(chǎn)情況客觀理性解讀檢測數(shù)據(jù)。

會議筆記由維科控股集團股份有限公司石薇琳記錄整理。